Schizophyllum Commune'iga saamine: looge leitud seentest steriilne kultuur: 3 sammu (piltidega)

2024 Autor: John Day | [email protected]. Viimati modifitseeritud: 2024-01-30 08:50

See juhend on keskendunud selgitamisele, kuidas luua seene Schizophyllum Commune (üldnimetus Split Gill seen) steriilne kultuur Petri tassil, kasutades leitud seeni. On leitud, et Schizophyllum Commune'il on üle 28 000 soo, seda võib leida kõigil mandritel, välja arvatud Antarktika, ning sellel on võime (nagu teistel "valge ja pruuni mädanemise seenel") halvendada endokriinseid häireid põhjustavat saastet (plastid, hormoone jäljendavad tööstuslikud naftakeemiatooted, nagu väetis Atrasiin, plastifikaator Bisfenool-A või sünteetiline hormoon Dietüülstilbestrool).

Ma vaatan üle metsaseente identifitseerimise tehnikaid, kuidas toitainegari Petri tassi valmistada ja kuidas leitud seente abil oma Petri tassis steriilset isoleeritud kultuuri kasvatada. Teised selle seeria juhendid hõlmavad selliseid tehnikaid nagu seente geneetiline identifitseerimine, lihtsad ensümaatilised testid, et testida seene võimet lagundada plasti ja hormooni imiteerivat saastet ning kuidas valmistada juustu S. Commune'iga.

See projekt sündis Mary Maggici, Paula Pini ja minu koostööst Hispaanias Barcelonas HANGARis residentuuri ajal. 1 õpetuse jaoks:)

Pildid pärinevad Schizophyllum Commune Fanzine ~ failid saab tasuta alla laadida siit

Residentuuri ajal olid meie kolm peamist eesmärki:

1 ~ Uurige ja seedige teaduslikku kirjandust Schizophyllum Commune'i ja selle erinevate koostoimete kohta hormoonide ja sisesekretsioonisüsteemi kahjustavate naftakeemiliste saasteainetega. S. Commune on üks paljudest "valge ja pruuni mädanemise" seentest, millel on võime lagundada hormonaalset ja sisesekretsioonisüsteemi kahjustavat reostust. Need seened toituvad puudest, eraldades võrgustunud kehadest "lignotselluloosseid" ensüüme või "mütseeli" ning need ensüümid suudavad lagundada tselluloosi ja ligniini, millest puud on valmistatud. Tselluloosi, ligniini ja EDS / hormoonide (nt atrasiin, BPA, östradiool, dietüülstilbestrool ja nonüülfenoolid) struktuursete sarnasuste tõttu võivad seente poolt eritatavad "lignotselluloosilised" ensüümid lagundada ka mitmesuguseid mürgiseid aineid. Lisaks toodab S. Commune immunostimuleerivaid polüsahhariide, mis on abiks vähktõve ennetamisel ja ravil (Jaapanis on see heaks kiidetud emakakaelavähi raviks), võib fermentatsiooni kaudu parandada teatud taimede fütoöstrogeenseid omadusi, seda saab kasutada laapi ja laktobatsilliuse asemel. juustuvalmistusprotsesse ja toodavad trombiini hüübimist lahustavaid ensüüme (kasulikud tromboosi ravis). Kummalisel kombel kasutab naftatööstus naftasaadusi ka neid samu "beeta-glükaane", mida saab vähiravimite ja immunostimulantidena keeva veega ekstraheerida, sidudes S. Commune'i veidra tagasisideahelaga endokriinsüsteemi kahjustavate ainete tootmiseks. naftakeemia, mida see suudab lagundada ja parandada.

2 ~ Töötage välja DIY ja DIWO (tehke seda koos teistega) protokollid, mis lihtsustavad neid vastuvõtjaid EDC -de ja seentega töötamiseks, et tõlkida kodifitseeritud teaduslikud teadmised paremini kättesaadavasse keelde. Kasutage neid retsepte hariduseks, küsitlemiseks, resistentsuseks molekulaarsete koloniseerimiste jaoks ja uute narratiivide loomiseks mitut liiki muutumise ja meie kollektiivse mutageneesi kohta.

3 ~ Esitage väljakutse sisesekretsioonisüsteemi kahjustavatele kemikaalidele (EDC) domineerivale cisheteronormatiivsele, queerphobic diskursusele. Tsiteerides Malin Ah-Kingi ja Eva Haywardi stipendiumi nendel teemadel: "Paljud uudisteväljaanded teatavad nendest hirmutavatest endokriinsetest lugudest meie koduõuelt. Püüdes neid probleeme esile tõsta-nagu me järgnevas meedias kirjeldame, on Frankensteini metamorfoos gaasivalgustatud mis ähvardab seksi ja seksuaalsust. Selle asemel, et käsitleda paljusid muid mürgistusega kokkupuutumisega seotud terviseriske, on kõige sensatsioonilisemad ja poleemilisemad teemad arutelu ja kriitilise vastuse all. See tekitab küsimusi: miks on seks tähtsam kui vähk, autoimmuunhaigus, ja isegi surm? Millised kultuurilised närvid (millest paljud on globaliseerunud) vallanduvad? Ja kuidas meie, feministlike muredega, suudame arutelu essentsialismist, seksismist ja heteronormatiivsusest eemale suunata? " (Mürgised sugu).

Schizophyllum Commune on ainulaadne "valgemädaniku seen", kuna sellel on leitud üle 28 000 geneetilise soo. See kohanemine, mida paljud teoretiseerivad, on võimaldanud selle liigi uskumatut geneetilist mitmekesisust, mis eksisteerib igal maailmajaos, välja arvatud Antarktika. Tahtsime tähistada selle organismi kaunist seksuaalset paljusust ühe näitena bioloogia erilisusest. Meedias ja isegi keskkonnaaktivistidel domineeriv EDC-sid ümbritsev diskursus keskendub suuresti ebateaduslikele narratiividele, et need molekulid põhjustavad teatud seksuaalsust või sugu, mida meie ühiskond patologiseerib, sildistab mittestandardseks ja püüab sageli kõrvaldada või vältida. Avalik pahameel EDC teaduslikult ebareaalsuse üle (mitte ainult hormoonid ja sisesekretsioonisüsteemi kahjustavad tegurid ei muuda inimesi kummaliseks ega transiks) on mitte ainult seksipaaniline, veider foobiline fookus, vaid ignoreerib kõiki hävitavalt tegelikke mõjusid, mida saame EDC-ga seostada: kilpnäärme häired, teatud vähid, muu terviserisk.

Samm: leidke oma kogukonnas elav Schizophyllum Commune

Schizophyllum Commune'i laboriklassi steriilseid kultuure saab osta umbes 350 dollari eest mikrobioloogilisest kultuuripangast, näiteks ATCC -st, mistõttu otsustasime metsseentest tasuta kultuuri kasvatada:)

Mul oli lihtne, sest olin lugenud Schizophyllum Commune'i kohta ja juhtusin just ühel päeval märkama, et see kasvab minu korteri ees puu otsas. Kui te ei ole nii õnnelik, et kogemata oma naabruskonnas S. Commune'i komistate, soovite minna metsapiirkonda, et otsida haigeid lehtpuid (puud, mis näevad välja nagu nad ei tee) liiga hästi) või langenud puud. S. Commune on üks levinumaid seeni kogu maailmas ja seda võib leida põhimõtteliselt kõikjal, kus on lehtpuu.

Mushroomobserver.org pakub suurepärast üksikasjalikku kirjeldust selle kohta, kus ja millal tõenäoliselt S. Commune'i leiate, ning kuidas seda tuvastada ja kuidas vältida sarnast välimust, mis võib põhjustada vale tuvastamist:

"IDENTIFITSEERIMINE: Schizophyllumi kommuuni saab hõlpsasti tuvastada lõhestatud lõpuste, tihedate juuste ja lehvikukujulise korgi järgi. Kork on 1-4,5 cm lai ja tavaliselt kest või lehvik, halli või valkja pinnaga. Basidiospoorid on 5-7,5 × 2 -3 mikromeetrit. Sarnane seen, mida tuntakse kui "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa, pole nii laialt levinud.

HABITATSIOON: Schizophyllum kommuun kasvab lehtpuul, kasutades ligniini lagundamiseks ensüüme ja põhjustades valget mädanemist. Nii et seda leidub enamikus puitunud piirkondades. Seda võib leida aastaringselt, kuna see suudab kuivada, parematel tingimustel rehüdreeruda ja seejärel jätkata eostumist.

See seen võib parasiitida väikese läbimõõduga puudel, mis on stressis muude tegurite, näiteks põua tõttu.

VAATA KA: Plicaturopsis crispa või "Crimped Gill" on sarnane Split Gill'iga. Sellel on ka kest/lehvikujuline viljakeha. Kübar on aga punakaspruun või kollakaspruun ning alumine külg on väga eristuv. Sellel on surutud sooned nagu lõpused, mis erinevad palju Schizophyllumi kommuuni lõhestatud lõpustest. Crimped Gill on vähem levinud, kuid leidmisel eristatav."

2. samm: valmistage S. Commune'ile toitainegaari plaadid kasvamiseks

Leitud S. kommuuni kultuuri eraldamiseks vajate seene jaoks toiduga täidetud Petri tasse. Linnaseekstrakt Agar on S. Commune jaoks lihtsalt valmistatav toit ehk "toitainekeskkond", mida saab valmistada kergesti ligipääsetavatest koostisosadest. See on ka hea toiduallikas, mida saab kasutada ensümaatiliste testide tegemisel S. Commune'i ja teiste valge- või pruunmädaniku seentega - seda protsessi käsitletakse teises juhendis.

KÜLGMÄRKUS: Kui teil oli probleeme S. Commune'i leidmisega, on samas perekonnas palju muid seeni, mida saab kultiveerida samade protsesside abil ja mis on sama head, kui mitte paremad sisesekretsioonisüsteemi kahjustavate saasteainete alandamisel. Türgi saba (Trametes Versicolor) on leitud paljudes uuringutes, milles vaadeldi sadu valgeid ja pruune mädanenud seeni, mis on kõrgeimad naftakeemilist reostust halvendavate "lignotselluloossete" ensüümide tootjad. Ka austrid on selles väga head.

Teen oma mikrobioloogilist tööd kogukonna bioloogialaboris nimega BUGSS (Baltimore Underground Science Space), kus mul on juurdepääs klaasnõudele, digitaalsetele kaaludele, gradueeritud silindritele, autoklaavile (kandja kuumuse ja rõhu steriliseerimiseks) jne. Sellistel laboritel on viimase kümne aasta jooksul kogu maailmas, seega võiksite seda loendit vaadata, et näha, kas teie lähedal on mõni. Kui teie piirkonnas pole sellist suurepärast kogukonnalaborit, peate selle protsessi jaoks investeerima mõnda põhivarustusse, näiteks:

1 ~ Digitaalne skaala koostisosade täpseks mõõtmiseks

2 ~ Survepliit, mis steriliseerib teie materjali kuumuse ja auruga

3 ~ Petri tassid, neid saab Internetist üsna odavalt osta, korduvkasutatav klaas või ühekordselt kasutatav plastik töötab, kuid korduvkasutatav on alati parem:)

4 ~ Mõned klaasnõud koostisosade segamiseks, steriliseerimiseks ja säilitamiseks.

Kui te ei soovi sellesse seadmesse investeerida, leiate veebisaitidelt nagu Amazon ostmiseks eelnevalt valatud linnaseekstrakti agariplaate-see on pikemas perspektiivis lihtsalt kallim, kui kavatsete jätkata mikrobioloogilise töö tegemist.

Juba praegu on palju suurepäraseid juhendeid ja YouTube'i videoid selle kohta, kuidas kodus ise toitainekeskkonda Petri tasse valmistada. Selle asemel, et sellesse väga üksikasjalikult minna, panen vaid paarile lingi - ja esitan 2% linnaseekstrakti agari retsepti, mida kasutate.

Freshcap -seened: juhend, kuidas kodus seente kasvatamiseks agariplaate valmistada

Mykoweb: Alustamine seenekasvatusega

Linnaseekstrakti agari tehnilised andmed

2% linnaseekstrakti agar (MEA) ~ ~ 1 liitri retsept:

20 g linnaseekstrakti (tavalist õlle valmistamise varustust saab osta Internetist)

15 g agarit (tahke aine - seda kasutatakse sageli toiduvalmistamiseks, nii et seda saab osta veebist või mõnest toidupoest)

1 liiter H20 (ma kasutan tavaliselt pöördosmoosi vett, mida saab osta enamikust toidupoodidest gallonkannudes)

Seda retsepti saab hõlpsasti muuta, kui soovite teha väiksemaid koguseid. Näiteks teen sageli ainult 250 ml korraga, nii et lõpuks kasutan ainult 5 grammi linnaseekstrakti, 3,75 grammi agarit ja 250 ml vett.

Samm: inokuleerige oma Petri tassi seentega

Seent, mida näete, nimetatakse viljakehaks, see on vaid väike osa organismist. Suurem osa selle kehast on peidetud puusse (või maasse), tarbides puitu. Seda seeneosa nimetatakse seeneniidistikuks. Schizophyllum Commune'i valge niitja, kombitsalise, risomaatilise, seeneniidistiku keha kasvatamiseks Petri tassile võtate varre proovi, steriliseerite ja asetate oma MEA plaatidele. Mütseel kasvab steriliseeritud seente varre südamiku proovist ja koloniseerib Petri tassi, nähes välja nagu valge puuvillane matt.

Te vajate:

• Linnaseekstrakti agari (MEA) plaadid, mille valmistasite eelmises etapis
• 70% isopropüülalkohol (hõõrdumisalkohol) ja pihustuspudel
• Paberrätikud
• Skalpell või lihtsalt roostevabast terasest pardel - karbilõikur töötab
• metallist pintsetid
• kindad
• Leek - ma kasutan instrumentide steriliseerimiseks alkohauli lampi, NonDisjunctionil on suurepärane õpetus selle tegemiseks siin.
• Lõikamiseks steriilne pind (ma kasutasin selleks steriilset Petri tassi)
• Parafilm, parafiinkile, mida kasutatakse Petri tasside tihendamiseks - kui teil seda pole, võite kasutada ka maalriteipi

STERIILNE TEHNIKA:

Peamine asi, mida steriilse tehnika kasutamisel proovite meeles pidada, on see, et baktereid ja eoseid langeb pidevalt õhku, nii et soovite hoida oma Petri tassid nii palju kui võimalik kaetud. Kui tõstate meediumivalamiseks kaane üles või inokuleerite, on alati parem hoida kaant veidi tassi kohal, võimaldades juurdepääsu sisemusele horisontaalselt, kuid hoides kaant tassi kohal, et vältida bakterite sissepääsu. Teiseks on inimeste, bakterite, seente ja muude organismide hiiglaslik konglomeraat, kuigi te ei näe seda, kuid teie ümber on tihe mikroobide pilv, mis hajub teie kehast laiali. Selle asemel, et lihtsalt oma nahapinnal istuda, ulatub teie mikrobiom õhku ~ ~ sooooooo, ärge kunagi vehkige kätega üle Petri tassi ega kummarduge sisse vaatamiseks üle avatud tassi. Ja kandke kindaid, kui need on sul olemas;)

SEADISTA OMA POOLSTERIILNE TÖÖRUUM

Valige mittepoorne tööpind, mis on puhas prahist ja prahist. Pihustage ala 70% isopropüülalkoholilahusega alla ja pühkige see paberrätikuga maha. Asetage leek oma tööpiirkonna keskele ja süüdake see. Soovite töötada leegile võimalikult lähedal, sest see loob selle ümber väikese steriilse välja. Asetage oma MEA plaadid ühele poole ja seeneproov steriilsele lõikepinnale teisel küljel. Tavaliselt kasutan steriilse lõikepinnana steriilset Petri tassi ja tööriista toetust. Valage väike isopropüülalkohol väikesesse klaasi - seda kasutate tera ja pintsettide steriliseerimiseks töötamise ajal.

*¡~ INOCULATE ~!*

Enne kui midagi ette võtate, steriliseerige oma tera ja pintsetid, kastes need isopropüülalkoholi ja hoides neid seejärel veidi leegi kohal. Pärast steriliseerimist asetage need oma steriilsele lõikepinnale, kui need maha panete. Hoidke pintsettidega seenevarre paigal ja lõigake selle otsast tükk. Võtke see tükk ja lõigake kõik küljed nii, et lõpuks saate väikese kuubiku seenetüve südamikuga, mille kõik välispinnad on eemaldatud. See aitab vabaneda kõikidest teistest seenel elavatest mikroobidest, et need ei saastaks teie kultuuri. Seejärel kastke varre tuum isopropüüli umbes 30 sekundiks, tõmmake välja ja laske leegi steriilses väljal kuivada (ärge kasutage leeki selle kuivatamiseks, see tapab seeni). Lehega steriliseerige pintsetid uuesti, kuni ootate varre südamiku kuivamist. Seejärel tõstke lihtsalt ühe oma MEA plaadi kaant täpselt nii palju, et pintsetid küljelt sisse libistaksid, ja asetage steriliseeritud pintsettidega varre südamik plaadi keskele. Sulgege plaat parafilmiga ja järgmise paari nädala jooksul peaksite nägema S. Commune seeneniidistikku plaati koloniseerimas.

Tavaliselt valmistan looduslike proovidega töötades mitu plaati, nii et kui ma saan saastumise, on mul tõenäoliselt vähemalt üks puhas kultuur.